外周血PBMNC分离及冻存

时间:2019-08-12 10:05来源:未知 作者:ydgmve2020yyx 点击:
PBMNC分离效果 按照GMP生产规范和临床ACI要求分离外周血PBMNC,冷冻保存前细胞活性为99.6%0.4%(n=5),与原始血样比,PBMNC回收率58.4%6.52%(n=5)。 细菌和真菌培养阴性,实现全程无菌处理
PBMNC分离效果

按照GMP生产规范和临床ACI要求分离外周血PBMNC,冷冻保存前细胞活性为99.6%±0.4%(n=5),与原始血样比,PBMNC回收率58.4%±6.52%(n=5)。

细菌和真菌培养阴性,实现全程无菌处理。MVE液氮罐

不同冷冻保护液对PBMNC的保护效果不同

PBMNC在-196℃液氮中储存24个月后复苏,镜下观察见细胞形态完整,圆形饱满,PBMNC复苏效率89.7%±3.82%,冻存液中含80%无血清培养基组和含80%自体血浆组比较,无统计学差异(P≥0.05)(表1)。

PBMNC冻存后诱导

AIL细胞的体外增殖及表型分析在倒置显微镜下观察显示,外周血单个核细胞呈悬浮生长,大小均匀,折光性一致,AIL经4d培养后部分细胞明显增大,可见细胞集落,胞核密度加强,体积增大,胞膜光滑,未见突起,新鲜与冻存后的单个核细胞诱导的AIL在形态和表型上无明显差别,增殖高峰期均在10-12d。MVE液氮罐

 

在培养过程中第14天,冻存组AIL细胞所占相对百分率由约2.3%上升约为10.4%,细胞数增加约1048倍,对照组AIL所占相对百分率由约2.3%上升为约11.3%,细胞数增加约1105倍。两组之间在细胞增长倍数与AIL所占百分比无显著差异(P>0.05)。

(表1)

效应细胞的体外细胞毒活性

新鲜的与冻存的单个核细胞诱导的AIL对NK敏感(K562)或非敏感株细胞(HeLa)及贴壁或悬浮生长的肿瘤细胞均显示出很强的杀伤活性,且该活性随效靶浓度比的增加而增大,两组间的细胞毒活性无显著性差异(P>0.05)(表2)。

图2:比较各种冷冻和对照组之间的增殖和细胞表型。A:所有表型培养前。B:所有在冷冻组表型培养14 天后。C:所有对照组表型培养14 天后,D:所有增殖。E:自体免疫淋巴细胞。MVE液氮罐
  • 本文链接地址:http://www.mvecryo.com/425.html